建库试剂盒
Library prep kit
康测科技鼠源绝对定量TCR建库试剂盒
产品简介

绝对定量TCR建库试剂盒适用于小鼠类TCRα链和β链文库构建,所构建的文库是针对于Illumina®高通量测序平台的文库。总RNA样品经过逆转录、接头连接、连接产物纯化、特异性扩增等步骤,最终得到适用于Illumina®平台的测序文库。

与其它商品化试剂盒相比,本试剂盒的优势在于:

技术优势

1.检测TCRRNA序列DNA分析相比,可以更为全面和准确地获得某一状态下TCR的多样性信息

2.基于5’RACE的方法5’RACE相较于MPCR测序方法,可以检测到更多的V-J pairing的多样性,同时具有更低的偏好性和较高的准确性

3.准确还原样本扩增前的原始状态在文库扩增之前为每一条RNA片段加上唯一的身份标签(Unique Molecular IdentifierUIDUMI),那么同一个片段扩增出来的产物均带有相同的标签,而天然重复片段则带有不同的标签。 测序完成后利用UID过滤数据,将相同标记的扩增产物进行合并,就能准确去除PCR扩增重复、同时保留样本的天然重复,一比一准确还原样本扩增前的原始状态从而准确分析TCR克隆的丰度,实现绝对定量;

4.引入校准机制,准确分析TCR的多样性TCR的高度多样性使得其对测序数据错误极为敏感,PCR和测序错误都可能被误认为序列的突变或重排,因此必须加入校准机制。UMI技术除了实现准确定量,还可纠正PCR和测序错误,锁定真实序列

5.PE150和PE250测序可选:PE250测序完整覆盖TCR全长,同时检测CDR1/2/3,全面研究CDR1/2对MHC的亲和力影响;PE150测序,靶向CDR3区,测序价格更为经济实惠

应用范围

本试剂盒适用于小鼠类T细胞受体库α链和β链文库构建。所构建的文库可用于Illumina®高通量测序平台测序。所需建库总RNA起始量为500ng

产品组成

其他所需材料

1.DNA clean beadsAgencourt® AMPure® XPreagent (Beckman #A63880, #A63881, #A63882),或其他适用于NGSDNA纯化磁珠;

2.80%乙醇(新鲜配制),nuclease free H2Onuclease free PCR管,磁力架,PCR仪,离心机,移液器,涡旋振荡仪,电泳仪等。

注意事项

1.建库所使用的DNA 纯化磁珠必须于2-8°C保存,否则会影响磁珠的结合效率;

2.磁珠使用前需从冰箱取出后应平衡至室温(约20-30min),每次吸取磁珠前都应将其涡旋振荡充分混匀;

3.磁珠最后一遍清洗后,务必吸干上清,少量杂质残留就会影响后续反应效率;

4.磁珠需充分干燥(表面由光亮褐色变为磨砂褐色),避免乙醇残留影响后续实验,但过分干燥(龟裂)将导致样品损失;

5.为避免反复冻融或长期使用后部分试剂效价降低,建议首次使用后将剩余试剂小份分装保存。