BCR测序(BCR-seq)

简介

B细胞受体(B cell receptor,BCR)是B细胞抗原识别决定性表面分子,BCR的H链由65-100种可变区(VH)、2种多变区(DH)、6种结合区(JH)和恒定区(CH)四部分基因片段组成(L链由可变区(VH)、结合区(JH)和恒定区(CH)三部分基因片段组成),发育过程中的B细胞, 在重组酶(RAG1、RAG2)作用下,形成了多样性高达1-2×10(11)的BCR。

BCR测序通过高通量测序技术检测靶向扩增后的BCR重链(heavy chain,H)和轻链(light chain,L),全面解析BCR基因重排碱基序列,以及各序列的丰度。可揭示机体在生理和病理状态下B细胞介导的体液免疫应答(B cell-mediated umoral immune response)状态改变和免疫球蛋白的多样性变化。


建库方法


技术流程


分析结果展示


康测技术优势

  • 康测科技专利RNA(靶向)建库技术,缩短建库时间的同时提高建库效率
  • 自主创新的UID技术帮助实现BCR表达量的绝对定量
  • 提供从样本处理、BCR扩增、建库测序到数据分析的一站式完善服务
  • 根据用户的具体需求,提供个性化的数据分析内容

案例解析

BCR测序发现BCR多样性为B-ALL病人诊断到持续性复发过程提供病情指导

文章作者分离了健康人和B细胞急性淋巴母细胞白血病(B-cell acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)患者的骨髓(BM)细胞和外周血单个核细胞(PBMC),通过MPCR扩增后BCR测序获得H链和L链基因全长序列信息。 通过比较发现:相比于健康人,B-ALL患者的体细胞高突变和次级重排引起较高的BCR克隆复杂性;B-ALL病人的病程(BM day0~1241;PB day0~944)与BCR克隆数量具有显著的相关性,该结果得到RT-qPCR定量结果验证(图1)。此外,体细胞高突变和次级重排引起B-ALL病人较高的BCR克隆复杂性和多样性可以用于B-ALL的亚克隆组成的跟踪。

图1

图2

因此,BCR-seq为B-ALL病人在起始化学治疗中存活的大量的克隆B细胞提供检测信息,同时为固有化学药物耐受和后期不充足治疗提供新的指导作用,也为全抗性克隆的出现提供及时的指导意见(图2)。

参考文献:

Bashford-Rogers, R. J., et al. (2016). “Eye on the B-ALL: B-cell receptor repertoires reveal persistence of numerous B-lymphoblastic leukemia subclones from diagnosis to relapse.” Leukemia 30(12): 2312-2321.