技术支持
Support
担心文章被argue?你的ChIP要过这一关
2019-03-25

如何判断ChIP抗体是否结合目的蛋白,完美的完成了任务?ChIP后进行WB检测就尤为重要了,检测报告能告诉我们ChIP实验结果究竟如何,WB检测不合格文章可能被argue哦。

 

 ChIP实验报告怎么看?

我们以几个项目的检测报告为例给大家解释ChIP的实验结果。

项目编号:KC-2018-C**。这个项目是对小鼠的细胞进行组蛋白ChIP,使用组蛋白特异性抗体,ChIP后的WB检测结果是这样的:

首先,这是一个非常好的结果:

除marker外共有9个泳道,从左往右依次是生物学重复样品NC-1~样品NC-3,每个样品3个泳道,分别为:样品(Input),使用目的组蛋白特异性抗体进行ChIP富集的产物(IP),使用IgG进行ChIP富集的产物(IgG)。

Input:阳性对照样品(ChIP实验前取部分样品作为阳性对照),在样品中可以检测到目的组蛋白的表达;

IP:用组蛋白特异性的抗体进行免疫沉淀(IP),对沉淀产物进行WB检测出现目的条带,说明免疫沉淀获得目的组蛋白;

IgG:使用无特异性的IgG代替特异性抗体进行免疫沉淀,作为空白对照,沉淀产物无目的条带,排除了其他因素(非特异结合)对ChIP实验的影响。

Input首先证明样品确实表达了目的蛋白,然后,IP样品与IgG样品比较可看出样品中的目的组蛋白通过抗体免疫沉淀,有明显的特异性富集,说明ChIP实验成功,此外,三个生物学重复都成功ChIP,且结果一致。

(注:抗体重链条带为加入二抗孵育时,因二抗结合一抗、IgG的重链而产生)

 

这样,ChIP-seq就完成了最关键的一步,可以进行后续的建库、测序、分析、挖掘了。有了这张漂亮的WB检测结果图,绝对没人敢质疑你的ChIP!

 

康测科技还做过哪些ChIP测序项目呢,随手一搜还真不少,我们一起来看吧。

 

转录因子ChIP-seq项目

1. 项目编号:KC-2018-C**,样品描述:真菌,抗体描述:Flag标签抗体

 

2. 项目编号:KC-2018-C**,样品描述:人源细胞,抗体描述:转录因子特异性抗体

在这个WB检测中,还检测了IP上清,IP上清也就是免疫沉淀后的上层清液,IP上清中有非目的蛋白,也可能有未被抗体结合的目的蛋白。通过WB检测,我们可以看出目的蛋白是否完全被结合、沉淀,是否需要增加抗体的量以提高免疫沉淀效果。从这张WB检测结果图中可知,样品中的目的蛋白被完全沉淀,上清中无目的蛋白。

 

3. 项目编号:KC-2018-C***,样品描述:人源细胞,抗体描述:转录因子特异性抗体

 

4. 项目编号:KC-2018-C***,样品描述:人源细胞,抗体描述:转录因子特异性抗体

 

5. 项目编号:KC-2018-C***,样品描述:微生物,抗体描述: Flag抗体

 

组蛋白ChIP-seq项目

6. 项目编号:KC-2018-C**,样品描述:小鼠细胞,抗体描述:组蛋白特异性抗体

 

 

7. 项目编号:KC-2018-C**,样品描述:植物组织,抗体描述:组蛋白特异性抗体

 

8. 项目编号:KC-2018-C**,样品描述:植物组织,抗体描述:组蛋白特异性抗体