跑胶常见问题及解决方案

跑胶常见问题及解决方案

凝胶电泳（Gel electrophoresis），通常称作跑胶，是分子生物学实验中最常见的技术之一。虽然，其原理简单、操作容易，但有时也会碰到各种奇奇怪怪的问题，如条带歪斜、空心、拖尾等。出现这些问题的原因是什么？又该如何解决？本期跟大家分享一下康测科技实验室小伙伴在跑胶方面的丰富经验。

Marker歪斜且照胶时背景分布密密麻麻的小白点

原因分析：可能是未及时更换电泳缓冲液或相应跑胶器具没有清理干净。靠近边缘的样品受到的电场强度可能与中心不同，从而导致条带歪斜。

解决技巧：在跑胶前检查缓冲液，确保缓冲液干净无污染，并选择适合实验需求的缓冲液类型。控制缓冲液的温度，并保证液面至少要覆盖凝胶表面约1毫米。

条带出现拖小尾情况

原因分析：如果凝胶时间和电泳条件和平时一致，那可能是上样时枪头戳到凝胶孔底部导致的小拖尾。

解决技巧：上样时小心仔细、认真专注，不能因为求快而把枪头误戳到胶里。

Marker条带不平整和歪斜

原因分析：Marker在胶孔中未完全沉降到孔底就立即电泳所致。

解决技巧：首先查看Marker使用说明书，试剂制造商通常会提供推荐的上样量和适用的琼脂糖浓度范围。有些Marker需要1:5或1:10的比例稀释。确保将Marker与上样缓冲液混合，以帮助其沉入加样孔底部，并且增加可见性。小心地将Marker加入到加样孔中，尽量避免产生气泡或溢出。标记好Marker的位置，以便于后续分析。还要关注一下Marker是否过期，平时使用Marker注意更换枪头防止污染。

Marker出现空心条带

原因分析：制胶时选用了1.5 mm的宽孔梳齿，在拔梳齿时导致胶孔不平整且未增加Marker上样量导致形成镂空状。

解决技巧：可以通过在凝胶完成后倒入少许制胶缓冲液TAE或TBE浸润梳齿后垂直缓慢拔出并注意使用宽梳齿时要适当增加Marker上样量。

除了上述细节外，还需额外注意以下几点：

1. 保证高质量制胶条件。使用高质量的琼脂糖并最好现用现配。确保制胶所用的器具清洁到位，干净无尘是必须的。确保微波时彻底融化琼脂糖粉，插入梳齿时认真检查底板是否平整，避免形成的胶孔歪斜或穿孔。

2. 根据DNA大小选择合适的胶浓度。较高浓度琼脂糖凝胶对于短片段DNA的分离性能好，而较低浓度琼脂糖凝胶有利于长片段DNA的分离。可依据实际情况选择合适浓度的琼脂糖凝胶进行电泳。等质量的DNA片段经电泳、核酸染料染色后，分子量较小的片段着色淡、条带粗；分子量较大的片段着色深、条带细。属于正常现象。 当长时间电泳后，DNA Marker/Ladder中分子量较小的片段可能出现着色较淡、条带模糊，属于正常现象

3. 适当延长跑胶时间。正常电压电流固定不变的情况下，胶的浓度越大，Marker跑的越慢。通过观察跑胶情况适当延长跑胶时长以达到根根分明的Marker条带。

当处理好所有细节后，必能成为像康测科技实验室小伙伴一样的跑胶小能手啦，祝大家在科研实验中都能跑出完美的胶图。